Molekularbiologische Charakterisierung des M802-Antigens (Reggie) im retinotectalen System des Goldfisches

Abstract

Ausgehend von einem monoklonalen Antikörper M802, der wachsende und vor allem regenerierende retinaleGanglienzellaxone im Sehsystem des adulten Goldfisches erkennt (Paschke, 1990), erfolgte in dieser Arbeit diemolekularbiologische Charakterisierung des M802 Antigens (Reggie).Der monoklonale Antikörper M802 erkennt eine Gruppe peripherer Membranproteine, die ein apparentesMolekulargewicht von 48 kD in der SDS PAGE aufweisen. Die Mikrosequenzierung des aus Goldfischlarven (30-60d alt) gereinigten Proteins durch Dr. F. Lottspeich (MPI für Biochemie, Martinsried) erbrachte eine N-terminale und 7interne Peptidsequenzen. Mithilfe dieser Peptidsequenzen gelang die Klonierung zweier partieller Reggie cDNASequenzen durch Einsatz der Polymerase chain reaction (PCR) aus Retinae adulter Goldfische 14 Tage nach einerDurchtrennung des optischen Nervs (ONS). Zu diesen beiden partiellen cDNAs wurden vollständige cDNA Klone auseiner cDNA Bibliothek fünf Tage alter Goldfischlarven isoliert. Dadurch wurde der Nachweis erbracht, daß durchM802 immunoaffinitätsgereinigtes Protein aus mindestens 2 verschiedenen Polypeptiden besteht - Reggie-1 undReggie-2, die Mitglieder einer neuen Proteinfamilie im ZNS der Vertebraten bilden. Diese beiden Proteine sind zu 45identisch, haben errechnete Molekulargewichte von 46,9 (Reggie-1) sowie 47,2 kD (Reggie-2) und sind das Produktmindestens zweier Gene im Goldfisch. Reggie-1 und Reggie-2 kodieren für überwiegend hydrophile Proteine, denenein klassisches Signalpeptid fehlt. Eine Datenbankrecherche zeigte, daß das Epidermal Surface Antigen (ESA), ein inder menschlichen Haut produziertes 35 kD Protein, ein mögliches humanes Homologes zu Reggie-1 darstellt, da es zu80 mit diesem identisch ist.